目前,乙肝五項的檢測方法有三大類,一類是定性檢測,另外兩類是半定量檢測和定量檢測。
一、定性檢測
定性檢測有國產(chǎn)乙肝金標法或者采用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)法。定性檢測的結(jié)果是告訴個體體內(nèi)有沒有乙肝表面抗原、乙肝表面抗體等指標。這種方法簡單、快速,成本較低,但是不夠精確靈敏,不能定量。特別是低濃度的標本,有時會漏診,因為沒有數(shù)值就無法動態(tài)觀察療效、評價治療效果。目前臨床上定性檢測已經(jīng)不常用,現(xiàn)其主要用于體檢篩查等。對于乙肝患者來講,盡量使用半定量和定量的檢測方法,其結(jié)果能較為清楚地反應(yīng)疾病的變化過程,為判斷預(yù)后提供依據(jù)。
二、半定量檢測
半定量和定量的檢測方法就是化驗單上標注的微?;瘜W(xué)發(fā)光法、電化學(xué)發(fā)光法等。酶聯(lián)免疫吸附法-ELISA法也可以進行半定量的檢測。半定量檢測化驗單上的單位是COI或者S/CO,它是一個數(shù)值,其主要原理是將測得的光密度結(jié)果(OD值)與一個臨界值(CUT OFF值)對比,比值越高代表乙肝表面抗原或者乙肝表面抗體等越高。半定量檢測在一定范圍內(nèi)可比性較好,靈敏性、準確性比定性的檢測方法要高,可以大致反映抗原抗體的水平。但是檢測的比值結(jié)果不是精確的數(shù)字,也沒有線性關(guān)系,因此稱為半定量。
三、定量檢測
目前應(yīng)用比較多的是定量檢測方法,其靈敏度、特異性好,主要針對乙肝表面抗原和抗體。例如HBsAg使用的單位是IU/mL,正常參考值是<0.05IU/mL。定量檢測的結(jié)果相對穩(wěn)定,因此其有很好的可比性。目前采用的試劑主要是以進口為主,不同廠家的試劑檢測范圍有所不同。檢測過程借助儀器設(shè)備完成,其自動化程度很高,可以對標本進行自動稀釋,減少人為誤差。不過由于試劑不同、批次不同,定標也不同,小范圍的波動意義不大。此外,檢測結(jié)果的COI值和定量結(jié)果之間沒有穩(wěn)定的換算關(guān)系。
定量檢測不僅可以很好地反映乙肝患者體內(nèi)病毒的變化以及抗病毒治療的效果,而且能夠預(yù)測遠期療效。例如HBsAg水平越低,反映體內(nèi)的ccc DNA、HBV DNA水平都比較低;抗病毒治療中HBsAg 水平下降越快,提示遠期預(yù)后較好;根據(jù)HBsAg的變化也可以預(yù)測HBeAg血清轉(zhuǎn)換率。因此,定量檢測方法被越來越多地應(yīng)用于接受抗病毒治療的患者。
HBsAg的定量檢測可以反映HBV DNA的水平,但它還不能代替HBV DNA的檢測。臨床上可以對HBV DNA進行定量檢測——通過實時熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)PCR測定HBV DNA。進口試劑的檢測下限是小于20 IU/mL,國產(chǎn)試劑在臨床的應(yīng)用也比較多,但標準低于進口試劑。PCR檢測方法先進,形式多種,如反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)RT-PCR可以對HCV RNA進行定量檢測。通過這種方法還可以進一步進行核酸序列的測定,檢測病毒基因型以及是否有耐藥基因的發(fā)生、乙肝病毒前C區(qū)的變異等。
定量檢測不僅能夠動態(tài)反映疾病的自然過程以及抗病毒治療的應(yīng)答情況,而且可以預(yù)測療效,為是否停藥提供依據(jù),因此受到了臨床醫(yī)師的重視,成為目前臨床應(yīng)用多的方法。